????????Argolight是一家法国的公司，专注于成像质量的控制，公司最初是为了解决NASA提出的请求，帮助他们保障国际空间站上的显微镜的准确性和可靠性，以达到验证显微镜质量且可以重复实验结果的目的。经过几年的努力，多代产品的更新，最终得到了NASA的认可，也亲眼见证了Argolight的产品搭乘着SpaceX的火箭，同宇航员一同进入了国际空间站。
现在全球已经有300多个客户在使用我们的产品，我们正在与他们一起应对成像质量和可重复性问题。
????????Argolight的产品满足ISO 21073:2019 标准，该标准旨在用于评估共焦激光扫描显微镜图像性能的指标，用于荧光生物标本成像领域。并且积极与NIST合作，旨在为成像质量评估出一个标准。
我们的产品包含稳定的荧光图案，具有精确定义的特征。图案可以用250nm到650nm之间的任何波长激发。发射光谱是一个宽的连续谱，从略高于激发波长开始，一直到800 nm。
一个产品包含几个荧光图案。每个图案都旨在评估显微镜的一个或多个参数：分辨率、场均匀性、强度响应、通道之间的配准精度等。Argolight的荧光图案是一种无机荧光物质，可以重复使用长达数年之久，并且对于贮存条件没有要求。Daybook软件也供免费使用，即便您不购买Argolight的软件，Daybook依然可以帮助您进行PSF的测量。
在今年Argolight使用一种改进的玻璃技术，产生两倍的荧光量：AG03，第三代 ArgoGlass?。AG03经过3年的研发，相比AG02具有更高的量子效率。在相同曝光下，这些图案现在比第一代显示出至少 100% 的荧光强度。校准片内荧光的存在仍然是确定的且持久的，荧光图案将永远可见。就此而言，这些校准片现在终身保修。
????????接下来我们展示一个具体的Confocal.nl的案例，该案例使用 Argo-SIM 来展示其横向分辨率的优势。
使用 RCM1 技术以 60x 1.4 放大倍率获取的示例图像（2×2 拼接图像）。COS-7 细胞中的微管蛋白丝。??Andreas Kurz，德国维尔茨堡大学
????????Confocal.nl是一家荷兰制造商，它开发了一种技术用来提高横向分辨率，同时保持标准共聚焦显微镜的切片能力。该公司由Erik Manders和Peter Drent于 2016 年创立。第二代再扫描共聚焦显微镜（RCM）是2021 年推出的一种新的超分辨率显微成像技术，它基于标准共焦显微镜，扩展了一个光学单元（再扫描），可将图像直接投射到 CCD 相机上。为了展示新系统的分辨率，制造商需要用已知尺寸的样品，通常使用荧光微球。然而，Confocal.NL 决定不再使用荧光微球，因为它们“有时难以集中拍摄并随着时间的推移而漂白”。此外，由于它们的尺寸不是无限小，导致扩大了显微镜点扩散函数 (PSF)，因此低估了光学系统的分辨率。
Confocal.nl 使用 Argo-SIM 的荧光模式进行分辨率测量。?该图案呈现出成对的 36 μm 长线，其间距逐渐增加，从 0 到 390 nm，步长为 30 nm。存在四组线：一组垂直，一组水平，两组位于 + 和 - 45°
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????????Confocal 最终决定使用 Argolight 校准片而不是荧光微球或PSF方式。某些型号的 Argolight校准片里面的荧光图案，专用于测量分辨率。该图案的线条由已知的距离隔开，这使得它非常适合测量系统区分物体的能力。Argolight 提供免费的图像分析软件Daybook。Daybook 中使用的方法依赖于对比度传递函数，即测量对比度与逐渐间隔的线之间的距离。
????????Confocal.nl使用带有 100x/1.5 油物镜 (UPLAPO100XOHR) 的 Olympus IX83 显微镜框架，使用其RCM2对Argo-SIM 校准片的荧光图案进行成像。在Argo-SIM 中，图案由成对的36 μm 长的线组成，它们的间距逐渐增加，从0到390 nm，步长为30 nm。该图案由405nm 激光激发，用Tucsen FL20-BW 相机检测。在应用说明：“使用 Argolight Argo-SIM校准片测量的再扫描共聚焦显微镜的横向分辨率”中，Confocal.nl指出：
采集设置样本平面中的像素大小为 16.5nm/像素，显微镜的 z-stepper 设置为 100nm 间隔，总共采用 4μm的 z-stack 以便能够进行适当的反卷积。随后由具有专用 RCM 点扩散函数的 Microvolution 执行反卷积。这些图显示了具有理想焦点的 z 轴切片。随后使用来自 Argolight 的 Daybook 3 软件对数据集进行分析，使用高斯拟合模型和 7.3% 的对比度标准获得结果（对应于在理想成像条件下等于显微镜 PSF 的 FWHM 的对比度值）。
用肉眼看图案图像，在150nm的距离就可以分辨出分辨率。对图像应用去卷积，之后图案的线条可以在120nm处解析。Daybook 中的图像分析使用 7.3% 的对比度标准（高斯拟合），在反卷积之前提供了 178.5nm 的横向分辨率，之后提供了 120nm 的横向分辨率。
“?Argo-SIM 校准片使我们能够定量和准确地确定 RCM2 的横向分辨率水平，而不会引入用户偏见。”?Confocal.nl
Daybook 中横向分辨率分析的示例结果（Zeiss 宽场 Axio Imager M2，配备 Zeiss Plan-Apochromat 63×/1.4 Oil 物镜，使用 Zeiss Colibri 2 照明，使用 Hamamatsu Orca-Flash 4.0 LT 相机收集） 7.3% 对比度标准（高斯拟合），分辨率为 386nm。
使用 Argo-SIM 校准片及其荧光图案，Confocal.nl 可以准确地确认他们的新系统 RCM2 达到了先前指定的规格并在图像中实现了超分辨率。这种方法提供的结果可以使其他研究人员或客户信任，因为他们的协议记录在案并依赖于 Argolight 的高质量认证标准。Argolight 非常自豪能够为 Confocal.NL 提供工具来展示他们的创新技术。
Argolight拥有数种产品，以满足不同客户的需求：
????????如果您对成像质量有要求，或者对自己的成像系统有所怀疑，不要犹豫，立即联系我们产品经理。